本產(chǎn)品適用于乳腺癌類器官的培養(yǎng)與結(jié)構(gòu)功能的維持。利用本產(chǎn)品培養(yǎng)得到的類器官能夠有效保留原發(fā)腫瘤的組織特性，可廣泛應(yīng)用于乳腺腫瘤的科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)。

乳腺癌類器官培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)操作流程

1）將KemiGel基質(zhì)膠恢復(fù)至室溫或者溫育到37℃ 3-5分鐘。  

2）組織樣本處理

2.1組織清洗 將組織轉(zhuǎn)移至無菌的50 mL離心管中，加入20-30 mL KemiGel組織清洗液，通過手工顛倒或渦旋震蕩儀進(jìn)行清洗3-5次。

2.2組織剪切 取60 mm無菌培養(yǎng)皿放置于冰盒上，將清洗好的樣本轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，使用無菌剪刀將組織剪至約1 mm 3-4小塊。

2.3組織消化 用組織消化酶將組織消化至松散、大部分組織碎片能夠通過1mL移液器吸頭時(shí)即可。

2.4終止消化  待步驟2.3組織消化完成后，向懸液中加入5 mL無菌Hank's平衡鹽溶液終止消化，1,500 rpm離心3 min，棄去上清備用。

2.5組織過濾 在步驟2.4的沉淀中加入5 mL無菌Hank's平衡鹽溶液進(jìn)行重懸，然后使用100 μm細(xì)胞篩網(wǎng)進(jìn)行過濾，收集濾液至50 mL無菌離心管中，1,500 rpm離心3 min，棄去上清收獲細(xì)胞沉淀。 （可選）紅細(xì)胞裂解 在步驟2.5收獲的細(xì)胞沉淀中加入2 mL紅細(xì)胞裂解液進(jìn)行重懸，室溫（15-25℃）放置2-5 min后，加入4 mL無菌Hank's平衡鹽溶液稀釋終止裂解，1,500rpm離心3 min，棄上清收獲細(xì)胞沉淀。 注意：本步驟適用于細(xì)胞沉淀中含有較多紅細(xì)胞時(shí)（沉淀呈紅色），并可根據(jù)紅細(xì)胞含量適當(dāng)調(diào)整紅細(xì)胞裂解液用量。

2.6制備細(xì)胞懸液 利用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行計(jì)數(shù)，使用乳腺癌類器官完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，并制備成104-105 cells/30 μL的細(xì)胞懸液。 注意：細(xì)胞懸液的濃度可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整。

2.7細(xì)胞接種和培養(yǎng) 2.7.1 用enhancer（不超過200 μL）與步驟2.6的細(xì)胞懸液（不超過200 μL）按照1:1的比例充分混勻。 

2.8 用基質(zhì)膠與步驟2.7.1制備的細(xì)胞懸液混合物1:1混合，接種至實(shí)驗(yàn)前預(yù)熱的培養(yǎng)皿中，避免產(chǎn)生氣泡。

2.9 將接種完細(xì)胞的培養(yǎng)皿放入CO2培養(yǎng)箱內(nèi)（37℃、5%的CO2濃度）靜置2 min，輕晃膠滴無明顯流動后小心倒扣，待其充分凝固（約15 min）。

2.10 待膠滴充分凝固后，向培養(yǎng)皿中加入4 mL的乳腺癌類器官完全培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱內(nèi)（37℃、5%的CO2濃度）培養(yǎng)。

3. 類器官的培養(yǎng)與照護(hù)   接種類器官培養(yǎng)基后的細(xì)胞，需密切觀察類器官的生長狀況，每隔3-4天更換一次乳腺癌類器官完全培養(yǎng)基，一般情況下培養(yǎng)6-12天可得到類器官。根據(jù)類器官的生長情況及實(shí)驗(yàn)需求，后續(xù)進(jìn)行乳腺癌類器官傳代、凍存、復(fù)蘇等操作。

4.類器官的傳代和凍存

 4.1 準(zhǔn)備基質(zhì)膠消化液，2-8℃儲存?zhèn)溆谩?/p>

4.2  吸出需傳代樣本培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液，棄掉。

4.3  在步驟4.2的培養(yǎng)皿中加入1-2 mL的基質(zhì)膠消化液。

4.4  使用基質(zhì)膠消化液浸潤過的1 mL槍頭尖口，將步驟4.3的膠滴從皿底徹底刮除。用移液器反復(fù)吹打，將膠滴吹散，放入培養(yǎng)箱（37℃、5%的CO2濃度）消化3-10 min。

注意: 1. 建議盡可能將膠滴吹散，避免影響消化效率。 2. 使用吸頭吹打時(shí)，避免吸頭尖端接觸到皿底。 3. 對于類器官平均直徑小于40 μm及細(xì)胞活性不佳的樣本應(yīng)相應(yīng)縮短消化時(shí)間，避免消化過度。 4.將步驟4.4消化好的細(xì)胞懸液收集到15 mL無菌離心管中，加入10 mL無菌Hank’s平衡鹽溶液，1,000 rpm離心3 min，棄去上清備用。 4.5 有關(guān)傳代操作的后續(xù)步驟參考傳統(tǒng)細(xì)胞傳代方法。

本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究，不能用于其他領(lǐng)域