1、技術(shù)原理
CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是最近幾年新出現(xiàn)的一種基因組編輯工具，它能夠完成RNA導(dǎo)向的DNA識別及編輯。與ZFN和TALEN技術(shù)相比，CRISPR/Cas9技術(shù)更易于操作，具有更強(qiáng)的可擴(kuò)展性。CRISPR技術(shù)使用一段序列特 異性向?qū)NA分子（sequence-specific guide RNA，sgRNA）引導(dǎo)高度保守的CRISPR相關(guān)基因（Crispr- associated gene, Cas gene, Cas9）編碼的核酸內(nèi)切酶，到靶位點(diǎn)處對DNA序列進(jìn)行特異性的切割，并引入單個(gè)或多個(gè)堿基的插入或缺失突變，從而完成基因組的編輯。目前，CRISPR/Cas9系統(tǒng)的高效基因組編輯功能已被應(yīng)用于多種模式生物，包括擬南芥、煙草、水稻等植物、人、小鼠、斑馬魚、秀麗隱桿線蟲及細(xì)菌。
2、技術(shù)優(yōu)勢
1)使用AtU6啟動子，廣泛適用于擬南芥、煙草等對雙子葉植物。
2)對靶基因?qū)崿F(xiàn)精準(zhǔn)編輯，引起DNA的插入缺失和替換。
3)載體構(gòu)建簡單，周期短，使用方便，而且成本較低。
3、應(yīng)用領(lǐng)域
1)廣泛應(yīng)用于基因的功能和調(diào)控研究，也可以加快動植物新品種的培育。
2)利用其打靶精確而高效的優(yōu)勢，可將其應(yīng)用于人類基因治療、新藥開發(fā)等生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域，針對目前人類所高發(fā)的重大疾病(例如癌癥、傳染病、遺傳病以及自體免疫性疾病等)開辟新的治療途徑，并且為臨床上的個(gè)性化治療提供方便。
4、技術(shù)路線及時(shí)間周期
5、實(shí)施方案
（1）靶序列分析、合成及CRISPR/Cas9載體構(gòu)建
詳細(xì)操作參照第四個(gè)實(shí)驗(yàn)中CRISPR/Cas9載體構(gòu)建中的操作。
（2）煙草遺傳轉(zhuǎn)化
詳細(xì)操作參照第五個(gè)實(shí)驗(yàn)基因轉(zhuǎn)化-過表達(dá)/RNAi中的操作。
6、服務(wù)分項(xiàng)內(nèi)容 周期 驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)
gRNA設(shè)計(jì)合成 5個(gè)工作日 分析報(bào)告
植物CRISPR/Cas9載體構(gòu)建 10個(gè)工作日 測序報(bào)告
煙草遺傳轉(zhuǎn)化 2-3個(gè)月 植株DNA PCR擴(kuò)增目的基因電泳圖特異條帶
煉苗移栽（可選） 15個(gè)工作日 -
收獲T1代種子（可選） 加速生長周期 -
靶基因擴(kuò)增測序 5個(gè)工作日 測序報(bào)告
